Медицина.

Сухие среды.

Отечественная промышленность выпускает сухие среды разного назначения: простые, элективные, дифференциально-диагностические, специальные. Это порошки во флаконах с завинчивающимися крышками. Хранят сухие среды в тёмном месте плотно закрытыми - гигроскопичны. В лаборатории из порошков готовят среды по прописи на этикетке.

Преимущество сухих сред по сравнению со средами, изготовленными в лаборатории, - стандартность ( их выпускают большими партиями ), простота приготовления, делающая их доступными в любых ( даже походных ) условиях, стабильность, экономичность. Важно, что их можно готовить из заменителей мяса: гидролизата казеина, фибрина, кильки и даже белковых фракций микробных клеток ( сарцин ).

Методы посевов

Важным этапом бактериологического исследования является посев. В зависимости от цели исследования, характера посевного материала и среды используют разные методы посева. Все они включают обязательную цель: оградить посев от посторонних микробов. Поэтому работать следует быстро, но без резких движений, усиливающих колебания воздуха. Во время посевов нельзя разговаривать. Посевы лучше делать в боксе ( при работе с заразным материалом необходимо выполнять правила личной безопасности).

Этапы выделения чистой культуры :

1 - й день - получение изолированных колоний. Каплю исследуемого материала петлей, пипеткой или стеклянной палочкой наносят на поверхность агара в чашке Петри. Шпателем втирают материал в поверхность среды; не прожигая и не перевертывая шпателя, производят посев на 2 - ой, а затем на 3 - й чашке. При таком посеве на 1 - ю чашку приходится много материала и соответственно много микробов, на 2 - ю меньше и на 3 - ю ещё меньше.
Можно получить изолированные колонии при посеве петлей. Для этого исследуемый материал эмульгируют в бульоне или изотоническом растворе натрия хлорида.

2 - й день - изучают рост микробов на чашках. В 1 - й чашке обычно бывает сплошной рост - выделить изолированную колонию не удаётся. На поверхности агара во 2 - й и 3 - й чашке вырастают изолированные колонии. Их изучают невооружённым глазом, с помощью лупы, при малом увеличении микроскопа и иногда в стереоскопическом микроскопе. Нужную колонию отмечают со стороны дна чашки и пересевают на скошенный агар. Посевы ставят в термостат. ( Пересевать можно только изолированные колонии. )

3 -й день - изучают характер роста на скошенном агаре. Делают мазок, окрашивают его и, убедившись в том, что культура чистая, приступают к ее изучению. На этом выделение чистой культуры заканчивается. Выделенная из определенного источника и изученная культура называется - "штаммом ".

При выделении чистой культуры из крови ( гемокультуры ) ее предварительно " подращивают " в жидкой среде : 10 - 15 мл стерильно взятой крови засевают в 100 - 150 мл жидкой среды. Так поступают потому, что в крови обычно мало микробов. Соотношение засеваемой крови и питательной среды 1 : 10 не случайно - так достигается разведение крови ( неразведенная кровь губительно действует на микроорганизмы ). Колбы с посевом ставят в термостат. Через сутки ( иногда через большее время, в зависимости от выделяемой культуры ) из содержимого колб делают высева на чашки для получения изолированных колоний. При необходимости повторяют высевы с интервалом в 2 - 3 дня.

При выделении чистой культуры из мочи, промывных вод желудка и других жидкостей их предварительно центрифугируют в асептических условиях и засевают осадок. Дальнейшее выделение чистой культуры производят обычным способом.

Для выделения чистой культуры широко применяют элективные среды. В ряде методов для получения чистых культур используют биологические особенности выделяемого микроба. Например, при выделении спорообразующих бактерий посевы 10 минут прогревают при 80 ° С, убивая этим вегетативные формы. При выделении возбудителя туберкулеза, устойчивого к кислотам и щелочам, с помощью этих веществ посевной материал освобождают от сопутствующей флоры. Для выделения пневмококка и палочки чумы исследуемый материал вводят белым мышам - в их организме, высокочувствительном к данным возбудителям, эти микробы размножаются быстрее других.

В научно - исследовательской работе, особенно при генетических исследованиях, необходимо получать культуры заведомо из одной клетки. Такая культура называется " клон ".
Для её получения чаще всего пользуется микроманипулятором - прибором, снабженным инструментами ( иглами,пипетками ) микроскопических размеров. С помощью держателя под контролем микроскопа их вводят в препарат " висячая капля ", извлекают нужную клетку ( одну ) и переносят ее в питательную среду.

Изучение выделенных культур

Изучение морфологии, подвижности, тинкториальных свойств, характера роста на средах ( культурные свойства ), ферментативной активности и ряда других особенностей выделяемого микроба позволяет установить его таксономическое положение, т.е классифицировать микроорганизм : определить его род, вид, тип, подтип, разновидность. Это называется " идентификацией ". Идентификация микроорганизмов очень важна при диагностике инфекций,установлении источников и путей ее передачи и в ряде других научно - практических исследований.

Культурные свойства

Различные виды микроорганизмов по - разному растут на средах. Эти различия служат для их дифференциации. Одни хорошо растут на простых средах, другие - требовательны и растут только на специальных. Микроорганизмы могут давать обильный ( пышный ) рост, умеренный или скудный. Культуры могут быть бесцветными, сероватыми,серо - голубыми. Культуры микроорганизмов, образующих пигмент, имеют разнообразную окраску : белую, жёлтую или золотистую у стафилококка, красную - у чудесной палочки, сине - зелёную - у сине - зелёной палочки, пигмент которой, растворимый в воде, окрашивает не только колонии, но и среду.

На плотных средах микроорганизмы в зависимости от количества посевного материала образуют или сплошной налет ( " газон " ), или изолированные колонии. Культуры бывают грубые и нежные, прозрачные и непрозрачные, с поверхностью матовой, блестящей, гладкой, шероховатой,сухой, бугристой.

Колонии могут быть крупные ( 4 - 5 мм в диаметре и больше ), средние ( 2 - 4 мм ), мелкие ( 1 - 2 мм ) и карликовые ( меньше 1 мм ). Они различаются по форме, расположению на поверхности среды ( выпуклые, полоские, куполообразные, вдавленные, круглые, розеткообразные, форме краев ( ровные, волнистые, изрезанные ).

В жидких средах микроорганизмы могут образовывать равномерную муть, давать осадок ( зернистый, пылевидный, хлопьевидный ) или пленку ( нежную, грубую, морщинистую ).

На полужидких средах при посеве уколом подвижные микробы вызывают помутнение толщи среды, неподвижные - растут только по " уколу ", оставляя остальную среду прозрачной.

Культурные свойства определяют изучая характер роста культуры простым глазом,с помощью лупы, под малым увеличением микроскопа или пользуясь стереоскопическим микроскопом. Величину и форму колоний форму краев и прозрачность изучают в проходящем свете, рассматривая чашки со стороны дна. В отражённом свете ( со стороны крышки ) определяют характер поверхности, окраску. Консистенцию определяют прикосновением петли.

Морфологические свойства

Изучение морфологии микробов тоже служит для их дифференциации. Морфологию изучают в окрашенных препаратах. Устанавливают форму и величину клеток, их расположение в препарате, наличие спор,капсул, жгутиков. В окрашенных препаратах определяют отношение микробов к краскам ( тинкториальные свойства ) - хорошо или плохо воспринимают краски, как относится к дифференциальным окраскам ( в какой цвет окрашивается по Граму, Цилю - Нильсену и другие ).