Медицина.

Подготовка к стерилизации лабораторной посуды.

1. Перед стерилизацией лабораторную посуду тщательно моют и сушат.

2. Пробирки, флаконы, бутыли, матрацы, колбы закрывают ватно - марлевыми пробками. Поверх пробки на каждый сосуд ( кроме пробирок ) надевают бумажный колпачок.

3. Чашки Петри стерилизуют завернутыми бумагу по 1 - 5 штук или в пеналах.

4. Пастеровские пипетки по 3 - 5 - 10 - 15 штук заворачивают в плотную оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты. Во время работы пипетки из пакета вынимают за верхний конец.

Лабораторную посуду стерелизуют :

а) Сухим жаром при температуре 150, 160 и 180 °С соответственно 2 часа, 1 час и 30 минут.

б) В автоклаве при давлении 1 АТМ, в течение 20 - 30 минут.

Стерилизация металлических инструментов.

Ножницы, скальпели, пинцеты и другие стерилизуют в 2% содовом растворе (сода предупреждает появление ржавчины и потерю остроты ) . Лезвия скальпелей и ножниц перед погружением в воду рекомендуется обертывать ватой.

Стерилизация перчаток и других резиновых изделий.

Перчатки, шланги, трубки и другие, загрязнённые вегетативной формой микробов, стерилизуют кипячением в 2 % растворе соды или текучим паром 30 минут; при загрязнении спороносной патогенной микрофлорой - в актоклаве при давлении 1 АТМ, в течении 30 минут.

Приготовление дезрастворов группы хлора.

1. Хлорная известь обладает высоким бактериальным действием. Её используют в микробиологической практике в виде порошка, 10 - 20 % хлорно - известкового молока и 0,2 - 10 % осветленного раствора.

2. Схема приготовления хлорно - известкового молока.

В таблице показана взаимосвязь между содержанием активного хлора в хлорной извести и её количеством, необходимым для приготовления 10 л холодно - известкового молока 10 - 20 % концентрации.

3. Хлорамин - содержит 25 - 26,5 % активного хлора. В микробиологических лабораториях пользуются 0, 2 - 10 % растворами хлорамина.

Приготовление маточного раствора хлорной извести.

1. Взять ёмкость ( стеклянные бутыли темного стекла с притертой пробкой, эмалированная или стеклянная посуда ) и поместить в неё 1 кг сухой хлорной извести, после чего, продолжая помешивать, добавить постепенно небольшое количество воды до получения кашицеобразной массы. И затем, перемешивая, добавить воду до объема 10 л, то есть для приготовления 10 % раствора хлорной извести необходимо взять : 1 кг сухой хлорной извести + 9 л воды = = 10 л раствора.

2. Свежеприготовленные растворы оставляют на 24 часа в прохладном темном помещении в закрытой посуде. Через 24 часа осторожно, не взбалтывая осадка, сливают осветленный раствор в другую емкость ( стеклянные емкости тёмного цвета, эмалированная или пластмассовая посуда ) для хранения до 10 дней.

3. При приготовлении маточного раствора на емкости ( на этикетке, которая крепится на ней ) указывается дата приготовления, концентрация раствора, должность, фамилия лица, подготовившего раствор.

Внимание !!! Использование оцинкованной посуды запрещено.

Дезрастворы группы фенола.

1. Карболовая кислота. Жидкая карболовая кислота содержит 90% кристаллического фенола и 10% воды. В микробиологических лабораториях используют 3 - 5% растворы карболовой кислоты.

Схема приготовления растворов карболовой кислоты.

2. Хромовая смесь. Пропись изготовления : В колбу наливают 150 мл концентрированной серной кислоты, туда же всыпают 25 г двухромовокислого калия. Полученную смесь оставляют стоять до растворения. Через сутки раствор тёмно - оранжевого цвета может быть применён для мытья посуды. Перед употреблением смесь надо подогреть до 45 - 50 % С . Если цвет смеси меняется на тёмно - зелёный, это говорит о её непригодности.

Выделение бактериофагов из патологического материала.

Исследуемую жидкость фильтруют от микробов. Твердый исследуемый материал ( почва,пищевые продукты, оформленые испражнения) измельчают в ступке, эмульгируют, фильтруют. Наличие фага в полученном фильтрате определяют в жидких питательных средах или на плотных средах по методу Отто или Грациа.

Обнаружение бактериофага на плотных питательных средах по методу Отто.
1,5 % МПА разливают в чашки Петри ( более высокая концентрация агара угнетает развитие колоний бактериофага ). После застудневания МПА засевают 16 - 18 часовой бульонной культурной бактерий, гомологичных искомому фагу. Для получения сплошного роста посев растирают шпателем. Спустя 5 - 10 минут после посева на подсушенную поверхность каплями наносят исследуемые фильтрат. Чашки ставят в термостат на 18 - 24 часа при температуре 37 % С.
Нет результатов : доказательством наличия бактериофага служит полное отсутствие роста культуры в месте попадания капели фильтрата ( активный бактериофаг ) или появление в этом месте мелких стерильных пятен - колоний бактериофага ( бактериофаг слабой активности ).

Техника фаготипирования микробов по методу Креджи и Иенсена.

В основу фаготипированиея положен принцип совместного выращивания типируемой культуры с типовым бактериофагом. Наступление лизиса определяет типовую принадлежность бактерий. Для фаготипирования бактерий применяют 1,5 % МПА с 5 % глицерина. Пророщенную бульонную культуру каплями наносят на поверхность питательной среды. Капли не должны растекаться. Они должны впитаться в течение 3 - 10 минут.

Затем на поверхность в каждой капли наносят по 1 капле типового фага с таким расчетом, чтобы часть культуры оставалась свободной от воздействия бактериофага ( для контроля роста культуры ). Чашки помещают в термостат при температуре 37 % С : через 6 - 8 часов производят учет результатов фаготипирования.

Наличие хорошо выраженного лизиса исследуемой культуры с одним из типовых фагов указывает на принадлежность культуры к данному фаготипу.